非洲猪瘟检测技术

 酶联免疫 吸 附 试 验 ＥＬＩＳＡ 是 一 种 能 够 直接检测较低或中等 毒 力 ＡＳＦＶ 感 染 猪 抗 体 的 试 验，是国际贸 易 指 定 试 验 方 法 之 一。 阻 断 ＥＬＩＳＡ 通 过包被的 ＡＳＦＶ 蛋白与 ＡＳＦＶ 特异 性 抗 体 反 应，氧 化物酶标记物竞 争 反 应，底 物 显 色 实 现 抗 体 检 测。 阳性样本检测孔呈色浅，ＯＤ 值 低，并 存 在 阻 断 率 越 大其抗体效价越高的对应关系；间接 ＥＬＩＳＡ 是通过包被蛋白与样品 中 抗 体 反 应、酶 标 抗 体 结 合 和 底 物 显色来确定其 ＡＳＦＶ 抗体是否为阳性。梁云浩等以
ｐ５４重组蛋 白 建 立 的 间 接 ＥＬＩＳＡ 的 检 测 灵 敏 度 可达１∶３２０，批 内、批 间 变 异 系 数 均 小 于 １０％。 目 前以 ｖｐ７３蛋白、ｖｐ７２ 蛋 白、ｐ５４ 蛋 白 包 被 的 各 类 商 品化 ＥＬＩＳＡ 试 剂 盒 被 广 泛 应 用，抗 体 检 测 试 剂 盒 有ＡＳＦ 阻断 ＥＬＩＳＡ 抗 体 检 测 试 剂 盒 （AccuPlus，中国）、ＡＳＦ 间 接 ＥＬＩＳＡ 抗 体 检 测 试 剂 盒 （ＩＤｖｅｔ，法国），抗原检测试 剂 盒 有 ＥＬＩＳＡＩＮＧＥＺＩＭ Ｋ３ 抗 原检测试剂盒（Ｉｎｇｅｎａｓａ，西 班 牙）。ＥＬＩＳＡＩＮＧＥＺＩＭ Ｋ３抗原检测试 剂 盒 的 敏 感 性 和 特 异 性 数 据 报 告 不多，但是已完成的相关检测表明其具有特异性，对于无力购买 ＰＣＲ 仪 等 相 关 设 备 进 行 ＰＣＲ 检 测，但 具备 ＥＬＩＳＡ 检 测 技 术 能 力 的 实 验 室 是 不 错 的 选 择。
因为急性型的大多数病例体内各组织中均存在较高水平的 ＡＳＦＶ，来自高发病率、高病死率的畜群的 样品采用 抗 原 ＥＬＩＳＡ 检 测 方 法 更 容 易 检 测 出 阳 性。

聚合酶链 反 应 ＰＣＲ 更 快 速、敏 感、特 异 性强，已经广 泛 用 于 ＡＳＦＶ 检 测，可 以 检 测 和 区 分 **分离株，适合 用 于 非 疫 区 国 家 的 疫 情 监 测 和 产 品入关检疫。杨吉 飞 等基 于 非 洲 猪 瘟 病 毒 ｖＰ７２ 基因建立了非洲猪瘟病毒检测的 ＰＣＲ 方法，检测欧盟非洲猪瘟参考 实 验 室 提 供 的 ＡＳＦＶ１７ 个 分 离 株 的基因组为阳性，曾少灵等从 ｖＰ７３基因序列中挑选设计了１对特异性 检 测 引 物，建 立 的 检 测 ＡＳＦＶ 的ＰＣＲ 比世界动物卫生组织（ＯＩＥ）推荐使用的 ２ 组引  物方法的灵 敏 度 高 出 １００ 倍 和 １０００ 倍，而 特 异 性  相当。胡 凌 等建 立 了 可 以 同 时 检 测 猪 瘟 病 毒（ＣＳＦＶ）、ＡＳＦＶ、猪伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）、猪繁殖与呼吸综 合 征 病 毒 （ＰＲＲＳＶ）和高致病 性 猪 繁 殖 与 呼 吸综合征病毒（ＨＰＰＲＲＳＶ）的 多 重 ＰＣＲ，具 有 对 单 一或混合感染的 临 床 样 本 进 行 快 速 鉴 别 检 测 的 优 势。
ＺｓａｋＬ 等描述了一种基于 ｖＰ７２的替代实时探针ＰＣＲ 检测方法，该法是在含有干燥的 ＰＣＲ 试剂的单 管内进行，使用 便 携 式 检 测 仪 器 可 以 获 得 实 时 检 测结果，简 化 了 ＰＣＲ 前 后 操 作 程 序，检 测 结 果 表 明 该方法特异、敏感，其敏感度达到 １．４ 个 ～８．４ 个 病 毒基因组等同物。