猪圆环病毒病诊断技术

圆环病毒病是由圆环病毒引起的一种传染病，其主要特征为的体质下降、消瘦、腹泻、呼吸困难、咳嗽、贫血和黄疸等。圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)属于圆环病毒科、圆环病毒属，为单股负链环状DNA病毒，分为1型和2型。目前还没有圆环病毒1型导致发病的报告，临床上感染圆环病毒2型很常见，普遍认为广泛存在于体内及源传代细胞系，由于其无致病性，所以无法通过临床症状或病理诊断来确定是否感染圆环病毒2型。但圆环病毒2型与群中发生的多种疾病相关，有其相应的临床症状和病理表现，在临床上主要引起断奶仔多系统衰竭综合征、皮炎肾病综合征、增生性坏死性肺炎、呼吸道疾病复合征及先天性震颤。圆环病毒2型与细小病毒、流感病毒、繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒等病原可以混合感染，致病性增强，从而增加群的死亡率。

圆环病毒病的诊断需要结合流行病学、临床症状、病理变化及实验室诊断相结合才能够确诊。

1、流行病学

对圆环病毒有较强的易感性，不同月龄的由呼吸道和消化道感染发病。5-16周龄的易感，尤其是5-12周龄的仔，一般于断奶后1-3周开始发病，急性发病群中病死率为10 %，如发生混合感染或继发感染，病死率可达25%以上。耐过后期发育**受阻，抵抗力下降，有时并发其它细菌病和病毒病，使死亡率**增加，场饲养管理不良、密度过大等常能诱发此病。

2、临床症状

感染圆环病毒2型，临床主要表现为体温升高、精神沉郁、食欲**、只渐进性消瘦或生长迟缓，体重减轻，贫血、皮肤苍白、肌肉衰弱无力、呼吸急促、咳喘、行动迟缓、被毛蓬乱无光泽、水样下痢或黑便，部分仔出现神经症状，四肢呈划水状等，个别关节肿胀，眼有分泌物。体表淋巴结肿大，特别是颌下和颈部淋巴结及腹股沟淋巴结肿大，肿胀的淋巴结有时可触摸到，多重感染会**加重上述临诊症状，并使病情变得极为复杂，用药效果不**。

3、病理病变

病死被毛蓬乱，皮肤苍白，个别表现为黄疸，淋巴结肿大，切面苍白，肺脏有出血斑，呈间质性肺炎、肿胀、间质增宽、质度似橡皮样，肺表面有红色至灰褐色的斑点。脾脏肿大，质地如肉，肾脏肿大苍白，被膜下有白色的坏死灶，肝脏边缘肿胀，肝小叶间结缔组织增生**，有的有纤维素膜包被，有的肝细胞坏死。腹股沟、肺门、肠系膜及颌下淋巴结肿大4倍-5倍，严重者为8倍-10倍，切面呈灰黄色，有出血。心内外膜出血，胸膜与肺发生粘连，胸腔内有少量纤维蛋白。剖检中最主要的症状是胃黏膜有的溃疡，有的穿孔，严重的整个胃像“筛子”。

4、实验室诊断技术

利用电镜技术可以直观、准确的鉴别病毒，根据病毒本身所具有的形态、结构和大小等不同特征，可即刻做出诊断。

利用兔高免血清结合福尔马林固定石蜡包埋组织中的圆环病毒2型抗原，再采用生物素标记的抗兔二抗与兔血清结合，最后用过氧化物酶标记的链霉素染色，此法可以发现阳性细胞内存在大量浓染的圆形结构，大小和形状与包涵体相似。

免疫荧光技术(IFA)可用于PCV的抗体检测及抗原组织定位的研究。是实验室检测圆环病毒2型的一种**、灵敏、成本低的方法。

酶联免疫吸附试验(ELISA)可以检测圆环病毒2型抗体，也可以检测其抗原，具有灵敏、简单、快捷的特点。

免疫过氧化物酶单层细胞试验是将生长有PCV的PK215细胞在96孔板上长成单层后检测血清中的抗体。免疫过氧化物酶单层细胞抗体检测试剂盒，用于血清中圆环病毒2型抗体检测，具有特异、敏感、操作简便、实用性强等特点。

实验室确诊依赖于病毒抗原检测和病毒抗体的检测。病毒抗原检测采用的方法有间接免疫荧光技术、核酸探针及原位杂交技术和聚合酶链诊断技术；病毒抗体的检测技术有酶联免疫吸附试验等；除此，尚有分子生物学技术。这些诊断方法中以聚合酶链诊断方法应用较多。目前，已有市售的圆环病毒2型抗体诊断试剂盒。